研究与评论:制药学与纳雷竞技苹果下载米技术杂志
菜单e-ISSN: 2347-7857 p-ISSN: 2347-7849
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IndukakaIpcowala药学院，超越GIDC, P.B. 53号，VitthalUdyognagar- 388 121，古吉拉特邦，印度。
收到日期:2014年1月15日接受日期:2月27日
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建立了一种灵敏、选择性和精确的高效液相色谱方法，并验证了同时测定杜苏来平和甲基钴胺素原料药和配方中的含量。采用Luna C18色谱柱(直径250 × 4.6 mm，粒径5 μm)为固定相，乙腈、0.02 M kh2po4和甲醇(50:40:10v/v, pH 6)为流动相。Dosulepin和甲基钴胺素的rt4分钟和2.1分钟。在260 nm的吸收模式下进行分析。线性回归分析结果表明，在0.05 ~ 20 μg/ml和0.1 ~ 20 μg/ml范围内，Dosulepin和甲基钴胺素的线性关系良好，相关系数分别为0.999和0.9991。多巴素和甲基钴胺素的定量限分别为0.05和0.1 μg/ml。根据ICH指南对该方法进行了验证，结果表明该方法具有准确性、精密度和鲁棒性。成功分析了上市配方。
Dosulepin (DOS)，甲基钴胺素(MCA)，液相色谱，验证
DOS的化学性质是3-(6h -二苯并[b,e]thiepin-11-ylidene)丙基二甲胺盐酸盐[1,2]。DOS是一种三环抗抑郁药(TCA)，抑制生物胺NA和5-HT在各自神经元[3]的主动再摄取。MCA在化学上是3-[({2-[(二氨基甲基)氨基]- 1,3 -噻唑-4-基}甲基)磺酰]- n '-磺胺酰丙酰胺[4]。MCA是vitB12[5]的活性形式。文献调查显示，目前还没有公开的色谱分析方法。本文介绍了一种简便、准确、精确的反相液相色谱法测定复方片剂中DOS和MCA含量的方法。根据国际协调会议(ICH)指南[6,7]对所提出的方法进行了优化和验证。在本工作中，已成功地尝试用反相高效液相色谱法同时估计这两种药物[8,9,10]。
仪器
仪器采用美国Perkin Elmer系列200,Phenomenex Luna C18色谱柱(250 x 4.6 mm id, 5μm粒度)进行分析方法开发。采用totalchrom navigator HPLC version 6.3.1软件对色谱数据进行处理。
材料
Prothiaden M(75毫克DOS和1.5毫克MCA)由Abbott印度有限公司生产。所有使用的化学品和试剂均为AR级。
试剂:所有使用的化学品均为AR级。
分析波长的选择:
采用紫外检测的高效液相色谱法的灵敏度取决于检测波长的选择。理想的波长是对待检测药物有良好反应的波长。两种药物的重叠紫外光谱显示，DOS和MCA在260 nm处吸收较明显，因此在该波长进行检测。（图1)．
图1:10 ppm盐酸多巴素和甲基钴胺素溶液在水中的重叠零阶光谱
流动相的制备
称取2.72 gm KH2PO4，溶于1000 ml HPLC水中，制备0.02 M KH2PO4缓冲液。流动相由500 ml乙腈、400 ml 0.02 M KH2PO4和100 ml甲醇混合制备。使用邻磷酸(1%)将pH调整为6。用41号Whatman滤纸过滤，声波10分钟，作为流动相。
标准原液的制备
将DOS(10毫克)和MCA(10毫克)精确称量，并转移到两个单独的10毫升容量瓶中，溶解在几毫升甲醇中。用甲醇使体积达到标记，得到分别含有1000μg/ml DOS和1000μg/ml MCA的溶液。从上述溶液中取适量等分液，流动相稀释，分别得到DOS 100μg/ml和MCA 100μg/ml。
色谱条件
Phenomenex®C-18 (250 x 4.6 mm id)色谱柱与流动相乙腈:0.02 M KH2PO4:甲醇(50:40:10，% v/v)平衡。pH 6用邻磷酸(1%)调整。流动相流速保持在1 ml/min，流出物监测在260 nm。样品以20 μL固定回路进样，总运行时间为6 min。
EPL和MCA的校准曲线
在相同的10ml容量瓶中取适量的DOS和MCA原液。将体积调至流动相标记处，得到DOS的终浓度分别为0.05、0.1、0.5、1、5、10、20μg/ml, MCA的终浓度分别为0.1、0.2、0.5、1、5、10、20μg/ml。
验证参数
线性和范围
DOS在0.05 ~ 20 μg/ml范围内呈线性关系，相关系数为0.9995。MCA在0.1 ~ 20 μg/ml范围内呈线性关系，相关系数为0.9997。对校准曲线进行了回归分析表1- 2和图3- 4．
图2:缓冲液:甲醇(50:40:10)
图3:高效液相色谱法测定DOS的校准曲线
图4:HPLC法MCA的校准曲线
表1:HPLC法对DOS的校准读数结果
表2:HPLC法MCA的校准读数结果
精度
盘中精度
通过每天3次测量3种浓度的反应来进行日内研究。日间doss和MCA的% RSD值分别为0.39 ~ 1.25和0.54 ~ 1.00。这些%RSD值均小于±2.0，表明该方法是精确的(表3和表4)．
表3:用于DOS的精确数据
表4:MCA精度数据
Interday精度
日间研究通过在3个不同的天内测量3种浓度的3次反应进行。
日间DOS和MCA的% RSD值分别为0.47 ~ 1.60和0.72 ~ 1.25。这些%RSD值均小于±2.0，表明该方法是精确的(表3和表4)．
可重复性
重复性研究通过测量每天6次单一浓度的反应进行。DOS和MCA重复性的% RSD值分别为0.56和0.63 (表5)．RSD值均小于±2.0，表明方法准确。
表5:DOS和MCA的重复性数据
精度
通过标准相加法计算DOS和MCA的回收率，确定了方法的准确性。DOS和MCA的加样回收率分别为99.42 ~ 101.89%和109.58 ~ 110.47% (表6)．
表6:采用所提出的高效液相色谱法测定DOS和MCA的精度数据
检测极限和定量极限
LOD是可检测但不能定量的分析物的最低量。从色谱目视观察，DOS和MCA的检出限分别为0.02和0.04 μg/ml。LOQ是可检测和定量的分析物的最低量。定量限分别为0.05和0.1 μg/ml。上述数据表明，两种药物的微克量均可准确测定。
鲁棒性
通过改变流动相组成、pH值和流速(表7)．结果无明显变化，表明该方法具有鲁棒性。
表7:在给定配方下，DOS和MCA的稳健性结果
溶液的稳定性
考察了DOS和MCA的标准液和样液在室温下24小时的稳定性。两种药物均稳定，回收率均超过98% (表8)．
表8:溶液稳定性研究
系统适宜性参数
进行了系统适用性测试，结果总结在表9
表9:系统适用性
上市配方分析
采用该方法对已上市配方进行分析，得到DOS回收率为99.49,MCA回收率为110.01。在DOS和MCA的色谱图中观察到Rt为4分钟和2.1分钟，并且没有观察到来自已上市片剂配方中的辅料的干扰(表11)．
表10:高效液相色谱(HPLC)验证参数概述
表11:上市配方分析
建立了高效液相色谱法(HPLC)测定DOS和MCA的方法。根据ICH Q2 (R1)指南对所提出的方法进行了准确性、精密度、线性度、特异性和鲁棒性验证。该方法已成功应用于已上市的配方中。
