科技创新研究国际杂志
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VenugopalGopikrishnan一号Raasaija Pazhanimurugan一号Thangaval Shanmugasundaram大全一号曼尼卡姆 Radhakrishnan2和拉马赛米Balagurunathan1*
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环境生物污损问题和限制现有防污复合物强化了从新源寻找新式生态友好防污复合物的工作本研究报告生物探矿,从探索较少的海洋生态系统到生物污物从Muttom、Parangipettai、Nagapattinam和Ennore沿海地区采集的染色样本中取出55个细菌分离物单词分解分解为pheno离散物归原型Bacillus、Aeromonas、Micrococus、Alcaligenes、Lactobcillus、Staphilococcus、Psedomonas和Kurthia生物膜成形容量所有单片使用板和管法评价共55个细菌隔离区中,25个分离区产生生物膜编组积极结果,发现生物膜生成器强健,生物膜生成器属于genus Staphilococcus、Micrococus、Vibrio和ALcaligenes潜在防污复合物隔离区完全从Parangipettai和Pitchavaram沿海地区采集的红树和河口沉积样本中取出50个活性分离物以agar插件法计算,50个活性分离器中42个阻塞一/多数生物排污细菌测试两种行为式隔离物viz, striepP33和trpPE7显示有希望活动量与最大数生物防污细菌测试生物活性代谢物分治
关键字 |
| 生物污物细菌、红树林、河口生物膜、Actinobactria和防污复合物 |
导 言 |
| 海洋生物污点是一个主要的论题性现象,具有深远后果,导致海洋和水产养殖业更大的经济损耗和运行失效(Kwong等人,2006年)。雷竞技网页版海洋环境中自然和人工表层与海水接触后,迅速被细菌、藻类、原生动物和宏生虫等微虫殖民化(Calow和Callow,2002年!Dobretsov等人,2006年沉浸在人造表层上,如船体、电站冷却系统管道和海产养殖设施等,造成巨大的经济和物质损失这会降低船舶速度和可操作性,增加燃料和清洁费用(Lewis,1994年)。贝类水产业因过度定居和整顿作物而蒙受经济损失(Hecht和Heasman,1999年!Carver et al.,2003年Lane and Willemsen,2004年为了防止海洋生物扰动,三丁锡和铜等广谱金属生物杀灭Thomas等人,2001年生物杀灭作用非常有效,但对非目标生物剧毒(Acseu,2000!Konstantinoi和Albanis,2004年由于这一不利影响,国际海事组织(IMO)和海洋环境保护委员会自2008年1月起禁止在防污漆中使用三丁基锡或其他含锡物质作为杀生物剂(Xu等人,2010年)。因此,有必要开发环境友好型替代防污剂,并在海洋领域经济上可行Actinobactria在生物多样性和生物活性代谢物生产方面,特别是抗生素生产方面大有希望的eubactria群根据Berdy最近报告(2012年),到目前为止约13 700微生物代谢物报告来自该团体成员Actinobacteria近些年来,海洋衍生活性代谢物包括防污复合物正在探索中(Lam,2006年)。在印度,海洋运算学研究,特别是防污复合物仍处于婴儿阶段本研究试图隔离海洋样本生物污物并定性,并报告泰米尔纳德东南岸选定红树林和河口沉积物对立行为并特别提到防污活动 |
二.材料和方法 |
| A.收集生物污点样本 |
| 生物污点样本从Kanyakumari区Mutom(M)周围的船面和其他海洋结构中分离801796N长长77044++74E/Parangipetai11030++33N长长79043++13++Ngapattinam10046+0长长79050+0和Ennore13021+75长长80032+16E)沿海地区,泰米尔纳德邦所有样本都用无菌聚苯袋采集并无休止地移入实验室。 |
| .b.隔离生物污泥细菌定性 |
| 约一克染色样本用消毒蒸馏水空格串行稀释百微升aquot从10-3转至10-5转至养分agar板排版复制件,所有板块在280C嵌入3-5天枚举后,选择、净化并分构养分agar斜体并补充2%NACL(Bavya等人,2011年)。 |
| C.生物胶片编组研究隔离细菌 |
| 开工板法 : |
| 菌群 Mucoid性质研究,通过种植ongo红agar板上所有菌株来研究(Mariana等,2009年)。18小时老菌培养 并发现CRA板平台在28摄氏度输入24-48小时并观察特征聚变 |
| 二叉Tube方法 : |
| 生物膜编译能力由细菌隔离通过坚持立管墙方式得到注意(Matthur等人,2006年)。inoculum使用2m24小时试运行280C后,扰频度调整为0.5McFarland标准生物膜实验用10毫升测试管中100毫升注入3毫升养分汤所有测试管都以95RPM速度保持24-48小时孵化后,含有免费细胞的文化汤,如果有的话,被丢弃管用3ml1x磷酸缓冲盐约3ml2%晶紫溶液添加并允许5分钟作用放弃晶紫外溶液并允许干后,所有管子都用无菌水冲刷所有管子都通过视觉观察测试管内墙生物膜所有管子加1.5ml33%冰酸并轻柔混合光密度值测量色度570纳米测试样本OD值与控制管中存在的PBS作比较 |
| 公元前特征化和生物防污细菌识别 |
| 显性特征如微态学(克染色、胶片染色、底栖染色和运动性)、文化特征(基础、微分和选择媒体)和生物化学特征等均通过标准程序研究(Cappuccino和Sherman,2005年)。海水对生物膜生成细菌分离物生长的影响也用养分agar研究,并配有不同浓度的海水基于字面特征,从genus层次识别出所选生物污物 |
| E.海洋演算器隔离 |
| 沉积样本取自Parangipettai11030++33长长7904313E红树管区、Parangipettai河口和Pitchavaram11摄氏39度长长7906662E)沿海地区,泰米尔纳德邦取下表层并转入无菌塑料袋后采集沉积样本中心部分采集的沉积样本在室温时空气干燥一周,转作无菌树状物并保留55摄氏10分钟,以阻抗粘积细菌生长(Pisano等人,1986年)。十克干泥样本添加到90毫升无菌蒸馏水中并串行稀释至10-5稀释stark案例agar介质编译50%海水并用于隔离可受教行为SCA介质补充Nalidixic酸(20++++g/ml)和Rioheximide(50+++++g/ml)以阻塞除actiobactria和fugi以外的细菌生长大约0.1毫升稀释入SCA板并使用无菌L棒传播5天后观察一个月所有样本都遵循同样的程序带疑似actioberia形态学的群落用酵母提取agar介质(Shiring和GottilebActinobactria纯文化维护为ISP2agar上倾斜存储量和40C时30%甘卓Broth本研究使用的所有介质都用50%滤波海水编译,除非另有说明(Bavya等人,2011年)。 |
| F.Actinobacteria特征分解 |
| 文化特征分析是通过将所有行为生物文化注入ISP2agar介质实现的280C所有板块嵌入十天所记录文化特征包括生长性、一致性、航空质量颜色、反侧色素和可溶性色素生产的存在(Shiring和Gottileb,1966年)。通过使用滑动文化法研究微态特征(Radhakrishnan等人,2011年)。约2毫升ISP2介质用Actinocete样片倒入不育微滑块表面薄层幻灯片保留在消毒小叶片中并生280C达10天后在光场显微镜下观察幻灯片40X放大记录微分特征包括空气芯片、基芯片、子宫片分解和孔链形态学基于Actinobactria增长模式对ISP2中微外观的生成结果,类似Actinocete分离物被丢弃并选择不同隔离物作进一步调查所选单片分组成Strepsetistes和非Strepsetes/稀有actinobactria |
| G.Actinobactria防生物污物 |
| 所有行为式分离物都通过agar插件法筛选对生物排污细菌的对抗性活动Actinoticete文化注入YEMEagar板块(20毫升/板块)并生280C达10天切除子宫生长后,YEME板切除5毫米直径agar插件测试生物使用消毒棉网注入养分Agar板agar插件安装在养分agar上用测试生物播种全部盘子在280C嵌入24小时阻抗区直径以毫米表示(Eccleston等人,2008年)。Actinobactrial隔离显示最大阻抗范围广博生物污物被选为进一步隔离防污复合物的可能候选物 |
| H.生产自选隔离物的防污代谢 |
| 固态浸入式文化对PE7和PM33菌株反污代谢生产的影响得到了调查两种菌株都注射入YEMEAGAR板和YEMEBORT每100毫升两种介质都用蒸馏水和海水制备YEMEAGAR板在280C嵌入12天YEME含有瓶子的Broth12天用95RPM旋转摇盘嵌入12天每隔24小时取YEMEagar板插件并测试生物防污细菌(Eccleston等2008年YEME每2mbroth从所有瓶中取出并离心机10000RPM10分钟免细胞超生素通过采用井喷法测试生物污物(Bavya等人,2011年)。 |
三.结晶 |
| A.生物污点样本中可耐受性细菌 |
| 所有采集生物污点样本性质粘稠,有棕色或绿色外观从不同沿海地区采集生物污点总可栽培菌群估计值(表1)。 |
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| .b.特征化和生物防污细菌识别 |
| 所有55个细菌分离物均在genus层次识别与不同生物污点分离的细菌归原型BacillusspM38,M56,P5,P13,N2,N12,N16,E15,E29,AeromonasspM13、M19、M20、N5、N6、N8、E6、E8微cussp(M11、M23、M50)、alcaligenesspM2、M28、M30、M33、M47、M48、M52、M54、P2、P8、P9、P14、N15、E4、E22、E26、LactobcillusspM6、M14、M21、M46、M51、M55、P4和StaphilococcusspM1,M3,M27,M45,PsedomonasspP1,P11,N9,N13,E2,E28,VibriospM25,Kurthiasp3级表2提供了从不同生物污点采样中回收的细菌分离数 |
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| 可见性所有隔离点保留为倾斜文化并刺入养分agar斜点文化海水效果显示,大多数细菌隔离物显示,无海水中构件生长不良某些生物污点细菌分离物,即M1、M11、P13和N9生长不良,未能产生介质色素而不加海水 |
| C.生物膜编译确认 |
| 开工板法 : |
| 共55个细菌隔离区中,25个分离区产生正面结果,以板块法生成生物膜各种偏差Staphilococcus、Micrococus、Vibrio和alcaligenes基因组显示强效积极效果 |
| 二叉Tube方法 : |
| 在55个细菌隔离物中,25个分离物产生阳性结果,用管法生成生物膜管法中,像Staphilococcus、Micrococus、Vibrio和Alcaligenes等细菌基因显示生物膜形成有强效积极效果(表3)。 |
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| 公元前隔离描述actinobactria |
| Pitchavaram生态圈中可发生作用量估计为3.2x104cfu/gm、Parangipettai红树林rhiz完全50Actinobactria,Pitchavaram和Parangipettai红树弧圈20分数和Parangipetai河口区10分数被选作进一步对立研究。42%分离产生白空菌类 34%分离产生灰色空气菌类空气和基芯片均由所有演算分离物生成(表4)。 |
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| E.Actinobactria对抗生物排污细菌的对立活动 |
| 与Pitchavaram生态圈相比,在筛选的50个行为生物分离物中,Parangipettai红树和河口生态圈显示活性有希望抗生素细菌测试(图1)。 |
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| ActinobactriestriesPM33和PE7显示对生物污损细菌最大数有良好的抑制作用(表5)。 |
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| F.生产自选隔离物的防污代谢 |
| 2运算器分离显示YEMEagar和YEMEBroth都增长良好YEME潜在菌株插件显示对Staphilococcussp和 Alcaligenes spr. |
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| 免细胞超生2Actimonecetes显示中度活动对Staphilococcussp阿里根斯sp与液化发酵相比,固态发酵显示良好的生长和有希望活动到12天结束 |
四.讨论 |
| 在当前研究中,从生物污点样本中分离出各种细菌基因上期研究中,Bacillussp.Psedomonassp和StaplincoccusspSarala等ibriosp.yetalssp.MicrococusspRurugan and Santhana Ramasamy,2002年和 Alcaligenssp常与海洋生物污迹样本隔离(Mary等人,1993年),并清晰报告所有上述细菌都能够组成生物膜但没有生物污点样本报告Kurthia物种使用不同方法研究环境生物膜形成(Kokare等人,2009年)以及临床细菌病原体(Matthur等人,2006年)。评估确认生物膜生成能力 所有细菌都从生物污点样本中分离55个细菌中25个细菌显示阳性生物膜编组未能产生板法正结果的隔离器用管法显示强生物膜编组管法比板法更宜从成本和敏感度方面研究生物膜编组Parangipettai和Pitchavaram红树生态圈多报告并特别提到其对抗性活动(Baragurunathan等,2001年Sivakumar等2007年Kathiresan等,2005年Dhanasekaran等人,2009年和酶潜力(Radhakrishnan等人,2010年)。Parangipetai和Pitchavaram海洋生态系统反污物活动报告很少(Kumaran等人,2010年!Bavya等人,2011年半晶数筛选中 84% 隔离抑制数数生物污物PE7和PM33显示最大抑制区 |
| 抗生素是二次代谢物,主要产自静止阶段结束时的丝状细菌(Joshi等人,2012年)。开始产生二级代谢物的生物体可能随压力变异(Antoun,2005年)。关于海洋运算器问题,海水对二次代谢物生产的影响有据可查(Mitra等人,2008年)。中一致性效果尚未报告在当前研究中,两种潜在运维菌株都用50%海水生成YEMEagar生物活性代谢物海洋运算法报告的大多数抗生素均由水下发酵产生(Sambamurthy and Ellaiah,1974年巴拉古鲁那坦和苏布拉曼尼亚州,1993年Wang等2010年而在目前研究中发现固体介质和海水会影响生物活性代谢物生成观察结果还确认出波菌株的海洋源多自然海洋化合物防污活动与细菌(Ortega-Morales等人,2008年)、藻类(Iyaparaj等人,2012年)、真治(Kwong等人,2006年)和海绵(Henrikson等人,1995年)隔离开来,但DiketofiCho等人,2012年,从海洋运算中报告有防污活动特别是,印度没有从海洋行为学分离出防污复合物,尽管很少有作者报告海洋行为学反污活动(Kumaran等人,2010年!Bavya等人,2011年依此可见,本研究中报告的两个活性菌株PE7和PM33是新增加的隔离新防污复合物源深入隔离并描述活性复合物从菌株和对软体类大型污物评价将开发出新奇防污物 |
V级结论 |
| 本研究成功识别印度东南海岸未开发防污复合物的海洋活化物研究描述印度泰米尔纳德不同沿海地区分离的不同生物防波菌特征和生物膜活动潜在菌株PE7和PM33将是一种大有前途的防污剂,两者都与涂层技术知识并用,将来可用于开发生态友好防污替代物 |
启蒙 |
| 作者感谢Periyar大学副校长兼注册官提供设施并衷心感谢UGC37-303/2009(SR)通过研究项目提供财政援助 |
引用 |
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